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人受體ELISA試劑盒基于什么原理工作？
更新時(shí)間：2024-12-11 點(diǎn)擊量：938
人受體ELISA試劑盒是一種用于檢測(cè)受體蛋白在樣本中含量的試劑盒，其基于ELISA(酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn))原理工作。ELISA是一種常用的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，通過特異性抗體的結(jié)合來(lái)檢測(cè)目標(biāo)蛋白或分子在樣本中的含量，其原理包括固相抗原-抗體結(jié)合、酶標(biāo)記的二抗結(jié)合和底物顯色三個(gè)主要步驟。
首先，人受體ELISA試劑盒中的微孔板表面涂覆有特定的抗受體抗體，這些抗體可以與待檢測(cè)樣本中的受體蛋白結(jié)合。樣本被加入到微孔板中，受體蛋白會(huì)與固相抗體結(jié)合，形成受體-抗體復(fù)合物。經(jīng)過洗滌步驟后，非特異性結(jié)合的物質(zhì)被洗掉，只有與抗體結(jié)合的受體蛋白殘留在微孔板中。
接下來(lái)，加入酶標(biāo)記的二抗，該二抗能夠與受體蛋白結(jié)合并形成二抗-受體復(fù)合物。這種二抗通常是與酶如辣根過氧化物酶(HRP)結(jié)合的二抗，當(dāng)二抗與受體蛋白結(jié)合后，會(huì)在微孔板中形成受體-二抗-HRP復(fù)合物。再次進(jìn)行洗滌步驟，將未結(jié)合的二抗排除。
最后，加入底物，底物被酶催化分解產(chǎn)生顯色產(chǎn)物。通常使用的底物是TMB(3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺)，其在酶作用下生成藍(lán)色產(chǎn)物。在反應(yīng)結(jié)束后，加入停止液，停止酶的反應(yīng)，并使顯色產(chǎn)物由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。
最終，通過測(cè)量微孔板中產(chǎn)生的黃色產(chǎn)物的吸光度，可以間接反映受體蛋白在樣本中的含量。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以計(jì)算出待檢測(cè)樣本中受體蛋白的濃度。人受體ELISA試劑盒通過這種原理，可以快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)樣本中受體蛋白的含量，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中。
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